VIOLET RED BILE GLUCOSE (VRBG) AGAR (ISO)

Code: CM1082 

Violet Red Bile Glucose (VRBG) Agar (ISO) là môi trường phát hiện và tăng sinh Enterobacteriaceae trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi và các mẫu môi trường. Môi trường này phù hợp với công thức và tiêu chuẩn ISO 21528-2:2004¹ và ISO/TS 11133-2:2003².

Hướng dẫn

Hòa tan 38.5g môi trường VRBG Agar (ISO) trong 1 lit nước cất. Đun sôi và trộn đều. Tiếp tục đun sôi trong 2 phút hoặc thời gian tối thiểu cần thiết để hòa tan hoàn toàn. KHÔNG HẤP KHỬ TRÙNG. Làm mát. Làm mát đến 44-47°C và sử dụng trong vòng 4 giờ. Trộn đều trước khi đổ đĩa. 

Mô tả 
Nhiều nhóm vi khuẩn hoặc các loài riêng lẻ khác nhau được sử dụng để cung cấp bằng chứng về việc thực phẩm kém vệ sinh, chế biến không đầy đủ hoặc ô nhiễm sau chế biến. Một số vi khuẩn, chẳng hạn như Escherichia coli, có trong đường tiêu hóa của nhiều loài động vật, kể cả con người, vì vậy sự hiện diện của chúng có thể đánh giá khả năng ô nhiễm phân.

Một trong những nhóm vi khuẩn phổ biến nhất được sử dụng làm sinh vật chỉ thị trong ngành công nghiệp thực phẩm là coliforms, là một phân nhóm trong họ Enterobacteriaceae. Tuy nhiên, trong nỗ lực cải thiện việc đánh giá chất lượng và an toàn thực phẩm của ngành công nghiệp thực phẩm, đã có một bước chuyển dần sang việc kiểm tra Enterobacteriaceae tổng số thay vì chỉ giới hạn kiểm tra đối với coliform. Trong thực phẩm đã qua chế biến, đặc biệt là thực phẩm được xử lý nhiệt, những sinh vật này có thể cung cấp một dấu hiệu đáng tin cậy về sự thất bại của quá trình, sự ô nhiễm trong quá trình chế biến hoặc sau chế biến..

Mossel và cộng sự đã sửa đổi Violet Red Bile Lactose Agar bằng cách thêm glucose để cải thiện khả năng phục hồi của tất cả các Enterobacteriaceae. Nghiên cứu sau đó của Mossel và Cowell^4,5 đã chứng minh rằng lactose có thể được loại bỏ, dẫn đến công thức được gọi là VRBG Agar.

Enterobacteriaceae lên men nhanh chóng glucose và do đó làm giảm pH của môi trường, tạo ra các khuẩn lạc có màu tím / hồng do bao gồm chất chỉ thị màu đỏ trung tính và màu tím tinh thể trong môi trường. Các khuẩn lạc này thường được bao quanh bởi các quầng màu tím của muối mật kết tủa. Tinh thể tím và muối mật ức chế sự phát triển của vi khuẩn Gram dương

Kỹ thuật 
Theo ISO / TS 11133-2: 20032, VRBG Agar (ISO) phải cung cấp tỷ lệ hiệu suất ≥0,5 đối với E. coli khi so sánh với cùng một chất cấy được trồng trên môi trường đối chứng (Tryptone Soya Agar). VRBG Agar (ISO) được thử nghiệm phù hợp với các yêu cầu của ISO / TS 11133-2: 2003³. Giấy chứng nhận chất lượng, chỉ ra các sinh vật được kiểm tra và năng suất, có sẵn cho mỗi lô.

Tham khảo phương pháp tiêu chuẩn thích hợp để có hướng dẫn đầy đủ. Sau đây là tổng quan về ISO 21528-2: 2004².

1. Chuẩn bị mẫu cần thử theo hướng dẫn trong phần liên quan của ISO 6887⁷ hoặc tiêu chuẩn cụ thể khi thích hợp.
2. Lấy hai đĩa Petri và chuyển vào mỗi đĩa 1,0ml mẫu thử hoặc huyền phù thử. Lặp lại quy trình với các dung dịch pha loãng thập phân của mẫu nếu được yêu cầu.
3. Trong vòng 15 phút, thêm khoảng 10ml VRGBA (ISO) nóng chảy, ở 44-47°C. Trộn cẩn thận môi trường với mẫu thử theo chuyển động ngang và để môi trường nguội.
4. Khi thạch đã đông lại, đổ thêm 15ml môi trường lên bề mặt đĩa cấy để ngăn chặn sự phát triển lan rộng.
5. Ủ trong 24 ± 2 giờ ở 37°C.
6. Đếm tổng số khuẩn lạc đặc trưng. Enterobacteriaceae tạo thành các khuẩn lạc màu tím / hồng có đường kính lớn hơn 0,5mm, có quầng. 
7. Chọn ngẫu nhiên năm khuẩn lạc màu tím / hồng để xác nhận.
8. Phủ lên thạch dinh dưỡng và ủ ở 37°C trong 24 ± 2 giờ. Chọn một khuẩn lạc được phân lập tốt từ mỗi đĩa để xác nhận bằng cách sử dụng các thử nghiệm oxy hóa và lên men.    

Điều kiện bảo quản và thời gian sử dụng

VRBG (ISO) nên được bảo quản trong bao bì gốc có nắp đậy kín ở 10-30°C. Khi được bảo quản theo chỉ dẫn, sản phẩm chưa mở sẽ giữ được độ bền cho đến hết hạn sử dụng in trên bao bì.

Các đĩa VRBG (ISO) được chuẩn bị tại địa phương có thể được lưu trữ trong tối đa 2 tuần khi được làm từ CM1082 theo hướng dẫn của nhà sản xuất và được bảo quản ở 2-8°C, tránh ánh nắng trực tiếp. Thời hạn sử dụng lâu hơn có thể đạt được, nhưng phải được xác nhận trong các điều kiện sản xuất và bảo quản tại địa phương có liên quan.

Tính chất vật lý
Môi trường bột: màu hồng, bột chảy tự do. 

Môi trường chuẩn bị: Gel màu hồng tím. 

Kiểm soát chất lượng

* This organism is also available as a Culti-Loop®

Các biện pháp phòng ngừa

VRBG Agar (ISO) cần được chuẩn bị, làm lạnh đến 44-47°C và sử dụng trong vòng 4 giờ.

VRBG Agar (ISO) chỉ sử dụng trong phòng thí nghiệm. Không sử dụng môi trường bột quá hạn sử dụng đã nêu hoặc nếu sản phẩm có bất kỳ dấu hiệu hư hỏng nào.

Tài liệu tham khảo

1. ISO 21528-1:2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae - Part 1: Detection and enumeration by MPN technique with pre-enrichment
2. ISO 21528-2:2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae - Part 2: Colony-count method 

3. ISO 11133:2014 Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of culture media.
4. Mossel, Eelderink, Koopmans and van Rossem. 1978. Lab Practice 27:1049 
5. Mossel, Eelderink, Koopmans and van Rossem. 1979. J. Food Protect. 42:470 
6. Cowell, N.D. and Morisetti, M.D. 1969 J. Sci. Fd. Agric., 20:573
7. ISO 6887 series Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination

ATCC® is a registered trademark of American Type Culture Collection